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膳食中的大部分維生素B2是以黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）輔酶形式和蛋白質結合存在。進入胃后，在的作用下，與蛋白質分離，在上轉變為游離型維生素B2后，在小腸上部被吸收。當攝入量較大時，肝腎常有較高的濃度，但身體貯存維生素B2的能力有限，超過腎閾即通過，以游離形式排出體外，因此每日身體組織的需要由飲食供給。

1879年英國化學家布魯斯發現牛奶的上層乳清中存在一種黃綠色的熒光色素，他們用各種方法提取，試圖發現其化學本質，都沒有成功。幾十年中，盡管世界許多科學家從不同來源的動植物都發現這種黃色物質，但都無法識別。1933年，美國科學家哥爾倍格等從1000多公斤牛奶中得到18毫克這種物質，后來人們因為其分子式上有一個核糖醇，命名為核黃素。