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生產方法以糖、氨、D-蘇氨酸為原料，經粘質賽氏桿菌(Serratiamarcescens)發酵而得，發酵液最終濃度0.5～1.5g/100ml。或以糖、氨、α-氨基丁酸為原料，用黃色小球菌(Micrococcusflavum)或枯草桿菌(Bacillussubtilis,Aerobactor)發酵而得，發酵液最終濃度可達1.0～1.5g/100ml。生產方法以D-別異白氨酸為原料，與乙酸酐進行酰化反應，產物以酰化酶處理分離D-異白氨酸后再水解而得。生產方法α-乙酰乳酸合成酶[培養液（菌種培養）]→菌種放大培養[發酵]→[30-31℃,60h]發酵液[過濾]→[加熱]上層液[草酸、硫酸（酸化）]→[過濾]濾液[H+732樹脂]→[（吸附分離）]洗脫液[濃縮]→[減壓蒸餾]濃縮液[NH3水（中和）]→沉淀[水（精制）]→結晶[105℃烘干]→L-異亮氨酸成品菌種培養種子培養基組成為葡萄糖2%，尿素0.3%,玉米漿2.5%，豆餅水解液0.1%(以干豆餅計)，調pH6.5,保溫118-120℃Chemicalbook，滅菌30min。一級種子培養。在1000ml錐形瓶中加入上述培養基200ml,接種一環牛肉膏斜面AS（即α-乙酰乳酸合成酶）1.998菌種,30℃培養,沖程7cm,頻率105次/min,16h。二級種子培養。二級種子培養基和一級種子培養基相似，另加菜籽油0.4%，接種量3.5%，培養8h，如此逐級放大培養足夠量的菌種。發酵、酸化發酵培養液是由硫酸銨4.5%,豆餅水解液0.4%，玉米漿2.0%,碳酸鈣4.5%,調pH至7.2，淀粉水解還原糖初糖濃度11.5所組成的。然后在5m3發酵罐中添加上述發酵培養液3t，加熱保溫118-120℃，控制壓力1.1×105Pa，滅菌30min后，立即通冰鹽水冷卻至25℃，接入1%菌種，以180r/min轉速攪拌保溫30-31℃，以0.21L/min通氣量發酵60h，在24-50h之間不斷添加尿素至0.6%，氨水至0.27%。待發酵60h后，將發酵液加熱至100℃，并保持10min。冷卻后過濾，除去菌體，濾液加工業用硫酸銨和草酸至pH3.5,過濾取濾液。