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 D-核糖與經縮合、催化氫化得核糖胺，后者與重氮鹽偶合、巴比妥酸環合即得本品。生產方法維生素B2自然存在于動物的肝、腎以及肉類和乳類等食物中，工業上生產方法有發酵法和化學合成法。發酵法以葡萄糖、玉米漿、無機鹽等為培養基，用特種活性菌阿氏假囊酵母(Eremotheciumashbyii)于28℃深Chemicalbook層發酵培養9d，發酵液中約含6～8g/L的核黃素產品。提取收率為60%～70%。合成法較好的合成法是先在Ph=4和28～30℃下由與D-核糖縮合，然后經鎳催化加氫還原得核糖胺，后與苯胺重氮鹽在16～26℃下偶合，再用低亞硫酸鈉(保險粉)還原，最后在醋酸中與巴比妥酸(四氧嘧啶)環合成維生素B2。

黃至橙黃色結晶性粉末，微臭，味微苦。熔點280℃(分解)。易溶于堿性溶液和氯化鈉溶液，微溶于水，略溶于乙醇，不溶于乙醚和氯仿。水溶液呈黃綠色，飽和水溶液呈中性。耐熱性Chemicalbook、耐酸性較好，在堿性溶液中或受紫外線照射則易受破壞，對還原劑也不穩定。大白鼠腹腔注射LD50560mg/kg，ADI0～0.5mg/kg(FAO/WHO，1994)。